废柴家里蹲绪山真寻，在某一天醒来发现自己变成了“女孩子”。在明白镜子中的美少女是自己，而混乱的真寻身旁的，是跳级进入大学的天才科学家妹妹绪山美波里。而美波里在他喝下的饮料中下了奇怪的药。
“已经两年没有出去了”
“一直热衷于不正经的游戏”
“偶尔也得工作一下”
美波里观察“变成女孩子的药”的经过，对于突然以女孩身份生活的真寻来说，上厕所、洗澡、穿裙子、戴胸罩等“女孩的生活”完全不了解。
而且，他还认识了美波里的中学时期的同学穗月和她的妹妹等人，真寻的日常开始变得越来越热闹。
苦难接连不断，“原”哥哥的命运到底会如何？
人物列表
性别：女
简介：绪山真寻，动漫《不当哥哥了！》中的人物。本作的主人公，是个自宅警备员，平时喜欢玩成人游戏，原本为男性身体，在喝了自己的妹妹研制出的一种药后变成女儿身，之后便慢慢习惯了女性身体的生活。
性别：女
简介：绪山美波里/绪山哨，动漫《不当哥哥了！》中的人物。绪山真寻的妹妹，天资聪慧过人，直接跳级上大学，平时在家喜欢搞一些古怪的研究，研制出了能使男性变成女性的药并在自己的哥哥身上进行了实验，对哥哥有超越兄妹的感情。
性别：女
简介：穗月枫，动漫《不当哥哥了！》中的人物。高中生，美波里的朋友，是学校里的辣妹，擅长做家务，很羡慕美波里的姐(兄)妹之情。同时也是绪山美波里初中时期的同学，成熟温柔但有时候会变得麻烦的大姐姐，在家务活上面是美波里的学习对象。
性别：女
简介：穗月红叶，动漫《不当哥哥了！》中的人物。穗月枫的妹妹，初中生，真寻的同班同学，刚开始被真寻当成了男孩子。对绪山真寻似乎有种不一般的好感？外向型且容易受到外界的影响。
性别：女
简介：樱花朝日，动漫《不当哥哥了！》中的人物。初中生，真寻的同班同学，红叶的青梅竹马，天然呆、喜欢运动且快熟，说话比较直性子。自来熟，和身边的人很亲近。会主动给朋友取外号并和她们搂搂抱抱，治愈力非常强。
性别：女
简介：室崎美夜，动漫《不当哥哥了！》中的人物。初中生，真寻的同班同学，胸部比同班的真寻、红叶、朝日还大些，轻度百合控。自己热衷的百合爱好发生在自己身上时会变成纯情少女，和穗月椛以及樱花朝日一起在浴室里洗澡时被朝日袭胸后眼神呆滞地感叹嫁不出去了。
性别：女
简介：天川那由多，所属动漫《不当哥哥了！》中的人物。绪山真寻升入二年级后的同学，不常说话，充满神秘感的初中生。知道真寻的秘密，对真寻自称是“姐姐”派来的帮手。
性别：女
简介：吾妻千岁，所属动漫《不当哥哥了！》中的人物。虽然自己并不是学生但是绪山美波里大学实验室里的前辈，也是天川那由多同父异母的姐姐，似乎对绪山真寻非常感兴趣。
性别：女
简介：伏见和香，所属动漫《不当哥哥了！》中的人物。绪山真寻的中学同学，和富士见宁梦很要好，是一位看不出来认真的孩子。身存在感较低，正式出场次数很少，但是经常作为背景出现。
性别：女
简介：富士见宁梦，所属动漫《不当哥哥了！》中的人物。绪山真寻的中学同学，几乎无论何时何地（包括泳池里）都在睡觉，且自始至终一句话也没说过。
性别：女
简介：高田纱月，所属动漫《不当哥哥了！》中的人物。绪山真寻的中学同学，“厌男二人组”的一员，经常迫害樱田悠太和千川凑，和椎名未祈很要好，和樱田悠太正处于交往中。
性别：女
简介：椎名未祈，所属动漫《不当哥哥了！》中的人物。绪山真寻的中学同学，“厌男二人组”的一员，经常迫害樱田悠太和千川凑，和高田纱月很要好，对千川凑有在默默关注。
性别：女
简介：八坂舞，所属动漫《不当哥哥了！》中的人物。绪山真寻的中学同学，“花哨二人组”的一员，擅长于社交，和长濑都子很要好。
性别：女
简介：长濑都子，所属动漫《不当哥哥了！》中的人物。绪山真寻的中学同学，“花哨二人组”的一员，疑似单亲家庭，和八坂舞很要好。
性别：男
简介：千川凑，所属动漫《不当哥哥了！》中的人物。绪山真寻的中学同学，和樱田悠太很要好，对绪山真寻有好感，经常因看向不该看的地方或者说错话而被高田纱月和椎名未祈围攻，正在被椎名未祈默默关注着。
性别：女
简介：西宫茉莉，所属动漫《不当哥哥了！》中的人物。绪山真寻的中学古文教师和班主任，对外表的要求相当严格[2]，自己私下却是个隐藏宅女。
性别：男
简介：樱花夕夜，所属动漫《不当哥哥了！》中的人物。樱花朝日的哥哥，初登场于漫画73话。是一个爱看色色杂志的温柔好哥哥。
性别：男
简介：樱田悠太，所属动漫《不当哥哥了！》中的人物。绪山真寻的中学同学，和千川凑很要好，对绪山真寻有好感，经常因看向不该看的地方或者说错话而被高田纱月和椎名未祈围攻，是高田纱月的暗恋对象。
